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                        RPA(恒温扩增)技术应用于肿瘤基因检测

                        RPA(恒温扩增)技术应用于肿瘤基因检测

                        肿瘤基因相关基因检测在癌症早期诊断中意义重大。目前的检测金标准为PCR和基因测序技术,而这些技术大多需要精密的仪器和复杂的试验流程,专业的实验人员配置。在现有的分子诊断技术中,以RPA为代表的核酸等温扩增技术以其快速,灵敏,无需仪器等特点,使突破以上壁垒成为可能。

                        近日,大连医科大学刘元斌课题组发明一种无需任何仪器,实现快速检测突变基因并肉眼识别的新方法,被称为AS-RPA-PNA-SYBR (ARPS) system。该方法以RPA(重组酶聚合酶恒温扩增技术)为基础,加之PNA技术(肽核酸类似物),并利用SYBR Green I核酸染料法显色,肉眼即可判断核酸扩增与否。

                        文章中,作者比较了在PCR,测序以及ARSP在非小细胞肺癌中EGFR突变检测应用,发现在非小细胞肺癌细胞系中,5分钟便能检测到EGFR 19Del(2)缺失突变,10分钟检测EGFRL SNP 突变,实现肉眼快速判断(图1),并在组织样本中同样得到验证(图2)。


                        同样,1020分钟之内成功检测到EGFR点突变。与传统的DNA测序方法相比较,ARPS有着许多优势之处,包括时间短,成本低,操作简单,无需精密仪器等,而且,在基因组DNA样本中,ARPS可以检测到30%40%的靶向突变位点,灵敏度与测序相当(图3)。之前有文章报道称,RPA技术与末端荧光检测和胶体金侧流试纸条以及微流控芯片结合检测EGFR突变,但还没有类似ARSP肉眼观测法的应用。

                        然而,ARSP法同样有待于进一步优化。比如,对于每一次EGFR检测来说,检测灵敏性和特异性都还有待提高;由于样本量有限,现仍需更多的临床样本实验进行验证。无论如何,在精准医疗大背景下,对于一些没有条件购买测序仪,以及不具备专业操作能力的不发达地区和国家,这种快速简便,操作简单的,无需任何仪器的ARSP基因检测法无疑为癌症基因检测提供有效参考,同时也为分子即时诊断领域(POCT)提供新的潜在解决方案。

                        文章链接:http://www.mdpi.com/1422-0067/17/5/792

                        国产化RPA试剂盒正在异军突起,南京沃博生物科技有限公司作为安普未来生物科技有限公司江苏省独家代理。安普未来开发的核酸恒温扩增技术称为重组酶聚合酶扩增 (MIPA) 技术全系列可替代英国TwistDx Inc公司的RPA试剂盒TwistAmp Basic TwistAmp exo TwistA m p nfoTwistAmp exo RTTwistAmp Basic RTMilenia Hybridtech 1 侧向流试剂条。

                        运用安普未来开发的核酸恒温扩增试剂盒RNA恒温快速扩增试剂盒(荧光型)并利用SYBR Green I核酸染料法显色,肉眼就可以看出有无扩增。

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