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                        染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)——ChIP-IT? Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

                        染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP——ChIP-IT? Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

                               染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是:在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤,解交联,蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白,经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析,比如qPCR,测序,ChIP-chipChIP re ChIP等。

                               Active motif公司的ChIP-IT? Express试剂盒使用protein G包被的磁珠,代替传统的琼脂糖珠,使得ChIP实验可以在1天之内完成。试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤,省时省力,实验者更容易获得成功的ChIP结果。

                        1 ChIP-IT? Express试剂盒的操作流程


                        ChIP-IT? Express试剂盒的优点

                        ● 组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂;

                        ● 可用于检测蛋白/DNA的相互作用,不仅仅限于组蛋白的修饰;

                        ● 与全基因组分析或PCR相关的方法兼容;

                        ● 无需进行试剂和操作步骤的优化;

                        ● 无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱,可对DNA进行快速纯化

                        传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体,如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言,这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下,使用转录因子特异性抗体,能够直接监测转录因子和DNA的相互作用,但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战,需要准备多种复杂的缓冲液,抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下,很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题,使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白,Active motif公司的ChIP-IT? Express试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂,包括阳性对照和阴性对照,使得研究者更容易成功的操作ChIP

                        图2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express试剂盒)

                        PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP实验每次需要2000,000个细胞,使用ChIP-IT Express试剂盒,仅需要100,000或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。

                        1%的甲醛固定Hela细胞10分钟,使用超声法破碎染色质,使用阴性对照IgGRNA pol II抗体,对不同细胞数量来源(100,000750,000个细胞)的染色质进行ChIP,重复2次。使用阳性对照引物GAPDHChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析(抗体和引物包含在人ChIP-IT对照试剂盒里,Active motif也可以提供小鼠和大鼠对照试剂盒)。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳,EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比,使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。

                        相关产品信息

                         供货商

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                         Active Motif

                         53008

                         ChIP-IT? Express

                         25 rxns

                         Active Motif

                         53009

                         ChIP-IT? Express Enzymatic

                         25 rxns

                        除此之外,Active motif公司还提供特殊应用的ChIP试剂盒以及多种ChIP相关的的辅产品。


                        供货商

                         产品编号

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                         Active Motif

                         53014

                         ChIP-IT? Protein G Magnetic Beads

                         25 rxns

                         Protein G包被的磁珠

                         Active Motif

                         53016

                         Re-ChIP-IT?

                         25 rxns

                         双重ChIP

                         Active Motif

                         53018

                         ChIP-IT? Express HT

                         96 rxns

                         高通量ChIP,一次可同时使用96分样本

                         Active Motif

                         53019

                         Ready-to-ChIP Hep G2 Chromatin

                         10 rxns

                         即用型的ChIP实验用染色质

                         Active Motif

                         53020

                         Ready-to-ChIP K-562 Chromatin

                         10 rxns

                         Active Motif

                         53021

                         Ready-to-ChIP NIH/3T3 Chromatin

                         10 rxns

                         Active Motif

                         53015

                        Ready-to-ChIP HeLa Chromatin

                         10 rxns

                         Active Motif

                         53026

                         ChIP-IT? Control qPCR Kit – Human

                         5 rxns

                         ChIP对照试剂盒,包含阴性对照IgG和阳性对照

                         RNA pol II抗体和PCR引物

                         Active Motif

                         53027

                         ChIP-IT? Control qPCR Kit – Mouse

                         5 rxns

                         Active Motif

                         53028

                         ChIP-IT? Control qPCR Kit – Rat

                         5 rxns

                         Active Motif

                         53010

                         ChIP-IT? Control Kit – Human

                         5 rxns

                         Active Motif

                         53011

                         ChIP-IT? Control Kit – Mouse

                         5 rxns

                         Active Motif

                         53012

                         ChIP-IT? Control Kit – Rat

                         5 rxns

                         Active Motif

                         53032

                         ChIP-IT? Express Shearing Kit

                         10 rxns

                         超声法染色质处理试剂盒

                         Active Motif

                         53035

                         ChIP-IT? Express Enzymatic Shearing Kit

                         10 rxns

                         酶切法染色质处理试剂盒

                         Active Motif

                         53040

                         ChIP-IT? High Sensitivity

                         16 rxns

                         高灵敏ChIP试剂盒,适用于低丰度转录因子、

                         低亲和力抗体或有限的样本

                         Active Motif

                         53041

                         ChIP-IT? ChIP-Seq

                         10 libraries

                         ChIP-Seq剂盒

                         Active Motif

                         53045

                         ChIP-IT? FFPE

                         16 rxns

                         适用于福尔马林固定,石蜡包埋组织样本的ChIP

                         Active Motif

                         53042

                         ChIP-IT? PBMC

                         16 rxns

                         适用于外周血单核细胞的ChIP

                         Active Motif

                         53024

                         RNA ChIP-IT?

                         25 rxns

                         用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用

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